date:2022-01-04 17:35:29
ibidi的傷口愈合系列產(chǎn)品，一直以來受到各個(gè)領(lǐng)域?qū)＜业囊恢潞迷u。在此我們收集了研究者的一些疑問，今天我們就這些問題進(jìn)行簡答的解答。ibidi傷口愈合插件設(shè)計(jì)精巧，操作簡單，標(biāo)準(zhǔn)化的數(shù)據(jù)分析方法恰恰彌補(bǔ)了傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法的不足。
問題一：要放多少細(xì)胞？
經(jīng)常會(huì)有老師對放多少細(xì)胞產(chǎn)生疑問，對于細(xì)胞量來說，我們的目的是要在插件的培養(yǎng)孔里面形成單層的細(xì)胞。細(xì)胞密度既不能過低，也不能過高。以35mm培養(yǎng)皿為例，通常采用下面的步驟：
1. 準(zhǔn)備5 x 105 cells/ml的細(xì)胞懸液. 105
2. 每孔加入 70 µl / 100 µl細(xì)胞懸液 (2孔或3孔插件每孔種35,000個(gè)細(xì)胞，4孔傷口愈合插件每孔種55,000個(gè)細(xì)胞）。
3. 37 °C孵育24小時(shí)。
4. 用滅菌鑷子移除傷口愈合插件。
5. 在35mm培養(yǎng)皿內(nèi)加入1ml新鮮培養(yǎng)基。
6. 放于倒置顯微鏡載物臺(tái)上，以4X-20X物鏡采集初始圖片，并按實(shí)驗(yàn)節(jié)點(diǎn)設(shè)置在同一位置采集圖片。
問題二：插件尺寸多大？能放進(jìn)6/24孔板么？能產(chǎn)生的劃痕寬度是多少？
Ibidi當(dāng)前有三種傷口愈合插件：2孔3孔和4孔插件，其中2孔和3孔插件單孔容積為70μl，尺寸分別為8.4 mm x 8.4 mm和 12.15 mm x 8.4 mm。單孔的細(xì)胞生長面積均為0.22cm2。4孔的單孔容積為110μl，插件的直徑為17mm，每孔的生長面積為0.35cm2，三種插件均能放入六孔板中，2孔傷口愈合插件也可放進(jìn)24孔板。所有的插件均能產(chǎn)生500μm的劃痕。此外，4孔插件除了能產(chǎn)生四個(gè)500μm的劃痕外，還包括一個(gè)1mm的中間劃痕。
問題三：只買插件能放在日常的培養(yǎng)耗材中么？對底部有什么要求？能用于蛋白包被過的表面么？自己放會(huì)不會(huì)漏液？
傳統(tǒng)方法
vs
ibidi傷口愈合插件
Ibidi的三種傷口愈合插件均有只提供單插件的包裝，需要研究人員自己準(zhǔn)備培養(yǎng)耗材。如果對成像無過高的要求，均可以使用日常的培養(yǎng)耗材，Ibidi插件采用硅膠材質(zhì)，底部為靜電吸附，無膠水，只需要底部是平整干凈即可。如果是蛋白包被的表面，則需要蛋白包被層完全干燥后，才能將插件放上面，插件不能貼在潮濕的表面，具體的包被建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)測試一下。在放入插件后，可以用滅菌鑷子輕輕壓插件的四壁，確保插件與底部完全貼合。
問題四：ibidi插件能夠反復(fù)使用么？
盡管ibidi插件的材質(zhì)可以濕熱滅菌并且對乙醇穩(wěn)定，但是，ibidi并不建議重復(fù)使用ibidi插件，由于是靜電吸附的原理，重復(fù)操作對底部的影響不可控。有可能會(huì)發(fā)生漏液等現(xiàn)象，影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。ibidi沒有重復(fù)使用的經(jīng)驗(yàn)，如果研究人員一定要重復(fù)使用，可能需要研究人員自己測試一下。
問題五：該如何采集圖片？需要采集同一培養(yǎng)皿的同一劃痕區(qū)域么？
由于劃痕實(shí)驗(yàn)的本質(zhì)就是觀測細(xì)胞遷移的速率。一般情況下需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)幾個(gè)圖像采集實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)，之后盡量在同一區(qū)域采集圖像。比如下圖采集為0h，10h，16h，這樣獲得的結(jié)果對比一目了然。
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